<<
>>

Определение уровня аутоантител к коллагенам I, II, III, IV и V типов в плазме крови

Уровень аутоантител к коллагенам I, II, III, IV и V типов в плазме крови определяли методом твердофазного иммуноферментного анализа с использованием тест-систем («Имтек», Россия) в соответствии с прилагаемыми инструкциями.

Метод основан на иммунологической реакции между аутоантителами к коллагену и коллагеном, иммобилизованным на внутренней поверхности лунок полистиролового планшета, с последующей детекцией образовавшегося комплекса с помощью пероксидазного конъюгата, ферментативная активность которого определяется по изменению окраски субстратной смеси. Количество связавшейся пероксидазы пропорционально количеству аутоантител в образце.

В лунки полистиролового планшета вносили образцы контрольной и исследуемой плазмы в разведении 1 : 50. В первый ряд планшета вносили в различных разведениях положительный контроль с исходной концентрацией 0,1 мг/мл. Планшет с растворами контрольных и исследуемых образцов инкубировали при комнатной температуре в течение часа с последующим трехкратным отмыванием не связавшихся белков. Затем во все лунки вносили разведенный конъюгат для проявления аутоантител (раствор очищенных кроличьих моноклональных антител к иммуноглобулину человека, конъюгированных с пероксидазой хрена) и инкубировали в тех же условиях. После трехкратного отмывания не связавшегося конъюгата для проявления реакции (окрашивания) вносили субстратную смесь (0,1% раствор ортофенилендиамина, содержащего 0,01% перекиси водорода) с последующей инкубацией при комнатной температуре до появления выраженного окрашивания в положительных контрольных образцах (2-10 минут). После этого реакцию останавливали 10% раствором серной кислоты. Интенсивность цветной реакции (оптическую плотность) измеряли на автоматическом фотометре вертикального сканирования («Мультискан», Венгрия) при длине волны 450 нм. Количественное определение аутоантител к коллагену производили с помощью калибровочной кривой, выстраиваемой при введении значений концентраций положительного контроля в различных разведениях и с учетом разведения исследуемых образцов.

Пример калибровочных кривых для определения уровня аутоантител к различным типам коллагена представлен на рисунке 3.5.

Таблица 3.1

Изучаемый показатель Уровень аутоантител, мкг/мл
Аутоантитела к коллагену I типа 3,2±0,3
Аутоантитела к коллагену II типа 2,1±0,2,
Аутоантитела к коллагену III типа 6,4±0,4
Аутоантитела к коллагену IV типа 2,3±0,2
Аутоантитела к коллагену V типа 10,1±0,7

Рис. 3.5. Образец калибровочных кривых для определения содержания аутоантител к коллагенам.

Концентрация аутоантител к коллагенам в плазме у 24 здоровых людей представлена на таблице 3.1.

Уровень аутоантител к коллагенам в плазме у здоровых людей

Постановка наборов для ИФА проводилась на базе научно- производственного отдела Ставропольского научно-исследовательского противочумного института. Автор выражает благодарность д.т.н. И.В. Жарниковой за помощь в выполнении исследований специальной части.

3.2.

<< | >>
Источник: СЕМЕНОВА АЛИНА БОРИСОВНА. КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ НЕКОТОРЫХ ЦИТОКИНОВ И АУТОАНТИТЕЛ К КОЛЛАГЕНАМ ПРИ НЕДИФФЕРЕНЦИРОВАННОЙ ДИСПЛАЗИИ СОЕДИНИТЕЛЬНОЙ ТКАНИ. ДИССЕРТАЦИЯ на соискание учёной степени кандидата медицинских наук. Ставрополь - 2006. 2006

Еще по теме Определение уровня аутоантител к коллагенам I, II, III, IV и V типов в плазме крови:

  1. Аутоантитела к коллагенам I, И, ПІ, IV и V типов при недифференцированной дисплазии соединительной ткани
  2. 2.2.4. Определение кортизола в плазме крови пациентов
  3. III.1.1. СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ УРОВНЕЙ АУТОАНТИТЕЛ ПРИ БЕРЕМЕННОСТИ ОСЛОЖНЕННОЙ И НЕОСЛОЖНЕННОЙ ПРЕЭКЛАМПСИЕЙ
  4. III. 1.4. КОРРЕЛЯЦИОННЫЙ АНАЛИЗ УРОВНЕЙ АУТОАНТИТЕЛ В ГРУППАХ ОБСЛЕДОВАННЫХ
  5. III. 1.2. СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ УРОВНЕЙ АУТОАНТИТЕЛ У БЕРЕМЕННЫХ С УМЕРЕННОЙ И ТЯЖЕЛОЙ ПРЕЭКЛАМПСИЕЙ
  6. Изменения содержания пуриновых оснований в плазме крови у детей при церебральной ишемии.
  7. Изменения факторов свертывании в плазме крови при церебральной ишемии у детей разного гестационного возраста.
  8. СЕМЕНОВА АЛИНА БОРИСОВНА. КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ НЕКОТОРЫХ ЦИТОКИНОВ И АУТОАНТИТЕЛ К КОЛЛАГЕНАМ ПРИ НЕДИФФЕРЕНЦИРОВАННОЙ ДИСПЛАЗИИ СОЕДИНИТЕЛЬНОЙ ТКАНИ. ДИССЕРТАЦИЯ на соискание учёной степени кандидата медицинских наук. Ставрополь - 2006, 2006
  9. III.2 ОПЫТ КЛИНИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ АУТОАНТИТЕЛ В ДИАГНОСТИКЕ ПРЕЭКЛАМПСИИ
  10. ГЛАВА 4. МАТРИКСНЫЕ МЕТАЛЛОПРОТЕИНАЗЫ 2 И 7 ТИПОВ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ И ОПУХОЛИ БОЛЬНЫХ НОВООБРАЗОВАНИЯМИ ЯИЧНИКОВ (результаты собственных исследований)
  11. Определение экспрессии растворимой сосудисто-клеточной адгезивной молекулы типа 1 - sVCAM-І в сыворотке крови Определени
  12. Осипова Наталия Андреевна. КЛИНИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ УРОВНЯ РЕГУЛЯТОРНЫХ АУТОАНТИТЕЛ ПРИ ПРЕЭКЛАМПСИИ. Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук. Москва 2014, 2014